甘油菌接种和制备简单教程

接种使用：
   取出甘油菌，水浴融化并轻轻摇动，直至完全溶解；
   无菌条件下打开管盖，将菌液转移至新鲜培养基中；
   若为厌氧菌，需确保操作环境无氧。

甘油制备：
   1. 配制10%-30%的甘油溶液，灭菌后备用；
   2. 取新鲜培养物，无菌吸取甘油溶液洗脱菌体或孢体，制成菌悬液；可使用涂布棒刮取菌体以提高菌悬液浓度；
   3. 若为菌液，可离心去除上清液（离心非必需操作，目的是提高菌体纯度），再混入甘油溶液制成菌悬液（可根据菌液体积适当提高甘油浓度）；
   4. 将菌悬液分装至冻存管，采用梯度均匀降温法，经验表明以1℃/min的速度降温至-40℃，再转移至-80℃冰箱或液氮中保存效果最佳。

注意事项：
   1. 单支甘油菌建议接种2个斜面或1个平板（液体培养按1:5-1:10的比例转接），转接量过多易导致复苏失败；
   2. 冻存后的甘油菌转移需使用干冰盒，若存放于液氮中需注意防护；
   3. 将菌株迅速置于水浴中融化，细菌建议40℃、真菌建议30℃，约2分钟完全溶解后即可接种至适宜培养基（无需离心弃上清，可带甘油液体直接活化）；
   4. 甘油菌应一次性用完，避免反复冻融；

5. 甘油溶液可用无菌水配制，也可添加蛋白胨水、BHI、TSB、血清等营养物质；
   6. 对于厌氧菌，甘油溶液需预先除氧，必要时可补充少量还原剂。